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ct26細(xì)胞培養(yǎng)步驟與傳代方法的介紹
日期：2025-01-25 17:20
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摘要：
CT-26細(xì)胞是以N-nitroso-N-methylurethane-(NNMU)誘導(dǎo)形成的未分化結(jié)腸癌細(xì)胞株。它克隆形成的細(xì)胞株命名為CT26.WT(ATCC CRL-2638)。用包含編碼典型腫瘤相關(guān)抗原(TAA)beta-半乳糖苷酶(beta-gal)的lacZ基因的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體LXSN穩(wěn)定轉(zhuǎn)染CT26。即使CT26.CL25表達了典型的TAA beta-半乳糖苷酶，在正常小鼠中CT26.CL25和CT26.WT的生長率與致死率也保持基本一致。與CT26.CL25(ATCC CRL-2639)一起可用作測試免疫治療程序的模型，并用于研究宿主免疫反應(yīng)。
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
培養(yǎng)步驟：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加4-6mL完全培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6cm皿中），培養(yǎng)過夜。**天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
傳代方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2.加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的完全培養(yǎng)基終止消化。
3.輕輕吹打細(xì)胞，完全脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.按5-6ml/瓶補加培養(yǎng)液，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。
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