大鼠胰島0細(xì)胞瘤細(xì)胞

(RIN-m5F)

細(xì)胞介紹

該細(xì)胞是大鼠胰島細(xì)胞RIN-m的克隆，分泌胰島素及L型多巴脫羧酶，不產(chǎn)生生

長激素抑制激素。

細(xì)胞特性

1)來源：大鼠，胰島

2)形態(tài)：上皮細(xì)胞樣，貼壁生長

3)含量：>lxl06 個(gè)/mL

4)污染：支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測為陰性

5)規(guī)格：T25瓶或者lmL凍存管包裝

運(yùn)輸和保存：使用T25瓶充液發(fā)送活細(xì)胞。收到細(xì)胞后，請先在顯微鏡下檢查細(xì)

胞生長狀態(tài)，并將T25瓶置于培養(yǎng)箱約6h或過夜后，再次檢查細(xì)胞狀態(tài)。若狀

態(tài)良好，可進(jìn)行細(xì)胞后續(xù)處理操作，按照以下方式進(jìn)行。若發(fā)現(xiàn)可疑污染物，請

及時(shí)與我們?nèi)〉寐?lián)系。

細(xì)胞用途：僅供科研使用。

細(xì)胞培養(yǎng)步驟

1)培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1.準(zhǔn)備 RPIVM-1640 培養(yǎng)基(RPIVM-1640:GIBCO,貨號 31800022,添加 NaHC031.5g八,

D-葡萄糖2.5g八，丙酮酸鈉O.llg八)，90%;上等胎牛血清，10%。

2.培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%;二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱

濕度為70%-80%。

3.凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。

2)細(xì)胞處理：

復(fù)蘇細(xì)胞：將含有l(wèi)mL細(xì)胞懸液的凍存管在37°C水浴中迅速搖晃解凍，加

入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)

加l-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)?

細(xì)胞懸液加入l〇cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。**天換液并檢

查細(xì)胞密度。

細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

力口 2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培養(yǎng)瓶中，置于37°C培

養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部

分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分

鐘，棄去上清液，補(bǔ)加l-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

將細(xì)胞懸液按1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者

瓶中。

細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄

去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約lml含血清的培養(yǎng)基后

加入凍存管中，再添加1〇%DMSO后進(jìn)行凍存。

注意事項(xiàng)：

收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰己揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請立

即與我們聯(lián)系。

所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物**臺內(nèi)操作，并請注

意防護(hù)，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。